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對于顯色液的使用你做的正確嗎?看這里
更新時(shí)間:2020-09-26 點(diǎn)擊次數:2731次
顯色液是一種采用了較新單一溶液顯色技術(shù),通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化TMB顯色,用于ELISA等的顯色液。本顯色液也可以用于檢測血液或血紅蛋白等樣品中的過(guò)氧化物酶含量。
通常的顯色試劑由多個(gè)組份組成,必須在使用前進(jìn)行配制,并且容易產(chǎn)生沉淀,使用相對不太方便,并且也容易導致檢測結果不太穩定。本顯色液采用了較新的顯色技術(shù),把所有的相關(guān)試劑全部配制在一個(gè)溶液中,僅由單一溶液組成,簡(jiǎn)化了操作步驟,并且使檢測結果更加穩定可靠。
顯色液的使用方法:
用適當的干凈容器(用純凈水反復沖洗),倒出適量的單組分TMB顯色液,待達到室溫后即可使用。
加液:加完HRP結合物并孵育一定時(shí)間后,用適當洗滌液洗板3-5次,每孔加TMB顯色液100ul。 根據個(gè)人實(shí)驗需要,在室溫(15-25℃)或37℃下避光溫育10-30分鐘或更長(cháng)時(shí)間,直至顯色至預期深淺。
終止:加入等體積的1M 鹽酸或硫酸溶液終止反應,孔中反應液由藍色變?yōu)辄S色。
讀數:終止反應后30分鐘內在450nm處測定吸光值。
注意:如果出現高的反應背景或沉淀,表明TMB底物反應過(guò)于強烈。為了避免產(chǎn)生沉淀,可在終止后馬上讀數;或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結合物。
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